泡菜污廢水處理
- 高鹽廢水是指鹽度（以 ＮａＣｌ計(jì)）至少為10％（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）的廢水，主要包括含鹽工業(yè)廢水、含鹽生活污水和其他含鹽廢水。四川泡菜是具有地方特色的發(fā)酵蔬菜制品，泡制泡菜后的高鹽廢水通常鹽度達(dá)到5.0％左右，其中含有大量的嗜鹽菌。
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高鹽廢水是指鹽度（以 ＮａＣｌ計(jì)）至少為10％（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）的廢水，主要包括含鹽工業(yè)廢水、含鹽生活污水和其他含鹽廢水。四川泡菜是具有地方特色的發(fā)酵蔬菜制品，泡制泡菜后的高鹽廢水通常鹽度達(dá)到5.0％左右，其中含有大量的嗜鹽菌。由于嗜鹽菌具有特殊的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)，能抵抗高鹽濃度環(huán)境脅迫，不易污染，可減少發(fā)酵工藝，降低成本，因此常用于發(fā)酵生產(chǎn)。嗜鹽菌種類繁多，它們的分類主要依據(jù)三個(gè)方面：表型特征、化學(xué)分類數(shù)據(jù)和分子生物學(xué)數(shù)據(jù)。
嗜鹽菌的分離和菌體的培養(yǎng)
將冷凍保藏的高鹽廢水置于培養(yǎng)箱中解凍活化，取0.1ｍＬ到ＥＰ管中，再加入0.9ｍＬ已滅菌的蒸餾水，用漩渦振蕩器混合均勻。從中取200μＬ均勻涂布于ＬＢ培養(yǎng)基（其中 ＮａＣｌ濃度為１５％ ）上，37℃倒置培養(yǎng)48ｈ。從長出的菌中挑選20株長勢較好的菌株轉(zhuǎn)接到新的LB培養(yǎng)基上，并對每一株菌進(jìn)行編號。
再對每株菌進(jìn)行反復(fù)劃線，直到得到單菌落。后將分離得到的菌劃線于保藏管中保藏待用。配制液體ＬＢ培養(yǎng)基300ｍＬ，分別置于３個(gè)三角瓶中，選取３株長勢較好，差異較大的菌分別接種于３個(gè)三角瓶中，并作好標(biāo)記，于37℃，200ｒ／ｍｉｎ搖床培養(yǎng),17ｈ 。
16ＳｒＤＮＡ序列及系統(tǒng)發(fā)育分析
基因組ＤＮＡ的提取和１６ＳｒＤＮＡ的擴(kuò)增及序列分析參見Ｔｏｒｕ Ｓｈｉｇｅｍａｔｓｕ等方法。引物采用細(xì)菌１６ＳｒＤＮＡ ＰＣＲ 擴(kuò) 增 通 用 引 物 Ｅｕ２７Ｆ （ ５′ － ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ － ３′ ， １０ μ Ｍ ）和原核微生物特異引物 １４９０Ｒ（５′ － ＧＧＴＴＡＣＣＴＴＧＴ ＴＡＣＧＡＣＴＴ － ３′ ， １０ μ Ｍ ）。ＰＣＲ擴(kuò)增條件：９４℃ 變性 １ｍｉｎ ， ５０℃ 退火 １．５ｍｉｎ ， ７２℃ 延伸２ｍｉｎ ， ３０ 個(gè)循環(huán)。 ＰＣＲ 產(chǎn)物經(jīng) ｐＧＥＭ － Ｔ 載體 Ｔ － Ａ 克隆入 Ｅ ． ｃｏｌｉ ＤＨ ５α ，挑選陽性菌落，提取重組質(zhì)粒。將質(zhì)粒送 ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ 公司進(jìn)行序列測定，并將測得的序列去載體后提交到 ＮＣＢＩ進(jìn)行比對，將所測序結(jié)果與數(shù)據(jù)庫中已知序列在ＧｅｎＢａｎｋ 數(shù)據(jù)庫中比對，獲得與實(shí)驗(yàn)菌株相似的典型菌株 １６ＳｒＤＮＡ 序列，選取序列用 Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ 和ＭＥＧＥ ４．０繪制系統(tǒng)發(fā)育樹，對所構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹評估。
三、結(jié)果
1.嗜鹽菌的分離結(jié)果
劃線分離后得到的單菌落和終分離得到的２０株單菌。由圖1，圖2可知，分離得到的這２０株單菌株有一定的耐鹽性，能在含鹽量為１５％的 ＬＢ培養(yǎng)基上生長；嗜鹽菌菌落部分為白色，部分為黃色，扁平，表面光滑，濕潤，直徑在１～２ｍｍ 左右。挑選出差別較大菌株分別命名為 ＭＳ１ 、 ＭＳ２ 、 ＭＳ３ 。
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